紫外可見(jiàn)分光光度計的系統誤差對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關(guān)于操作誤差，多數情況下，通過(guò)嚴格按操作程序測量、實(shí)驗室儀器調零、準確稱(chēng)量等來(lái)控制或減少這種誤差的產(chǎn)生。關(guān)于實(shí)驗室儀器的系統誤差，可通過(guò)對紫外可見(jiàn)分光光度計的定期校正來(lái)克服，那么，紫外可見(jiàn)分光光度計將如何進(jìn)行校正呢。

為了獲得準確的研究結果，準確測得樣品溶液的吸光度非常關(guān)鍵。一般來(lái)說(shuō)，分析結果的不可靠性與偶然誤差和系統誤差有關(guān)。偶然誤差影響測量的精密度，可通過(guò)足夠數量測量的統計處理來(lái)減少;系統誤差影響測量結果的準確度，可在大體相同實(shí)驗條件下，用比較一種物質(zhì)的準確測量結果，使系統誤差統一起來(lái)。

一、紫外分光光度計 -紫外可見(jiàn)分光光度法

紫外分光光度計：根據物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見(jiàn)光區任意選擇不同波長(cháng)的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(cháng)的光能量，相應地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子
、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。

紫外可見(jiàn)分光光度法：紫外-可見(jiàn)分光光度法是在190〜800mn波長(cháng)范圍內測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當光穿過(guò)被測物質(zhì)溶液時(shí)，物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長(cháng)不同而變化。因此，通過(guò)測定物質(zhì)在不同波長(cháng)處的吸光度，并繪制其吸光度與波長(cháng)的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定ZUI大吸收波長(cháng)和ZUI小吸收波物質(zhì)的吸收光譜具有與其結構相關(guān)的特征性。因此，可以通過(guò)特定波長(cháng)范圍內樣品的光譜與對照光譜或對照品光譜的比較，或通過(guò)確定ZUI大吸收波長(cháng)，或通過(guò)測量?jì)蓚€(gè)特定波長(cháng)處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時(shí)，在ZUI大吸收波長(cháng)處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數法求算出樣品溶液的濃度。

二、儀器的校正和檢定

波長(cháng)：儀器波長(cháng)的允許誤差為：紫外光區± lnm , 500nm附近士 2nm。

由于環(huán)境境因素對機械部分的影響，儀器的波長(cháng)經(jīng)常會(huì )略有變動(dòng)，因此除應定期對所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應于測定前校正測定波長(cháng)。常用汞燈中的較強譜線(xiàn) 237. 83nm，253. 65nm，275. 28nm， 296. 73nm，313.16nm，334.15nm， 365. 02nm，404. 66nm， 435. 83nm，546. 07nm 與576. 96nm；或用儀器中氘燈的486. 02nm與656.10nm譜線(xiàn)進(jìn)行校正；鈥玻璃在波長(cháng) 279. 4nm，287. 5nm， 333. 7nm，360. 9nm，418. 5nm， 460. 0nm， 484. 5nm， 536. 2nm 與 637. 5nm 處有尖銳吸收峰，也可作波長(cháng)校正用，但因來(lái)源不同或隨著(zhù)時(shí)間的推移會(huì )有微小的變化，使用時(shí)應注意；近年來(lái)，常使用高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器，以10%高氯酸溶液為溶劑，配制含氧化鈥（Ho203 ) 4 % 的溶液，該溶液的吸收峰波長(cháng)為241. 13nm, 278. l0nm, 287. 18nm，333. 44nm，345.47nm,361,
31nm, 416. 28nm, 451. 30nm，485. 29nm, 536. 64nm和 640.52nm。

吸光度的準確度：可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。

取在120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱(chēng)定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規定的波長(cháng)處測定并計算其吸收系數，并與規定的吸收系數比較

其關(guān)系可以用朗伯-比爾定律表述如下：

式中：

A為吸光度；

T為透光率；

E為吸收系數，常用的表示方法，其物理意義為當溶液濃度為1%（g/ml）,液層厚度為1cm時(shí)的吸光度數值；

c為100ml溶液中所含物質(zhì)的重量（按干燥品或無(wú)水物計算），g；雜散光的檢查：可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規定的波長(cháng)處測定透光率,應符合表中的規定。

三、日常維護

一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械部分的誤差或性能下降；造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護保養時(shí)應定期加以校正。應具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設備，特別是地處南方地區的實(shí)驗室。

二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機械系統的靈活性、降低各種限位開(kāi)關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內衛生條件，防塵。

三、儀器使用一定周期后，內部會(huì )積累一定量的塵埃，ZUI好由維修工程師或在工程師指導下定期開(kāi)啟儀器外罩對內部進(jìn)行除塵工作，同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對光路進(jìn)行校準，對機械部分進(jìn)行清潔和必要的潤滑，ZUI后，恢復原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測、調校與記錄。